アラビノガラクタンタンパク質の定量 - motosehiroyasu @ ウィキ

Single radial gel diffusion法

 

・通常のSDS-PAGE用ゲル板を組み立てる

・以下のものを混ぜ、total 10 mL にする

　Agarose S (DNA用の標準的なもの) 0.1 g

　NaCl 60 mg

　10% NaN3 20 microL (2 mg でもOK)

　beta-Glc Yariv 試薬　final が10 microg / mLになるように 

 

・ゲル板と上記の混合液を電子レンジであたためる

・溶液をゲル板に注ぎ、室温で冷やして固める

 

・上側のゲル板をとり、パスツールピペットの先で穴をあけてウエルを作成

・0.8-1 microL のサンプルをウエルにアプライ（gum arabic をスタンダードにする）

・湿箱に入れて、室温で一晩おく

　湿箱は何でも良い。タッパーに四角いシャーレの高床と水をいれ、高床上にゲル板をおく、など。

 

・実体顕微鏡とCCDでHaloを記録

・Haloの直径をimagej やphotoshop で定量

　直径がAGPの量に比例（gum arabic をスタンダードにする）